复旦大学胡夕春/陶中华教授团队：三阴性乳腺癌创新治疗策略
11月18日，复旦大学胡夕春/陶中华教授研究团队在期刊《Clinical And Translational Medicine》上发表了研究论文，题为“Chaperonin-containing TCP1 subunit 6A inhibition via TRIM21-mediated K48-linked ubiquitination suppresses triple-negative breast cancer progression through the AKT signalling pathway”，本研究中，研究人员发现TNBC患者CCT6A表达升高与不良预后和淋巴结转移相关。在机制上，CCT6A通过激活PI3K/AKT通路促进细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化和增殖。TRIM21 RING结构域是一个E3连接酶，促进k48相关的泛素化介导的CCT6A降解，从而抑制TNBC的进展。此外，CCT6A过表达小鼠肿瘤组织中CD8+ T细胞数量和分泌干扰素γ浓度降低，而CCT6A和TRIM21双过表达组肿瘤组织中CD8+ T细胞数量和分泌干扰素γ浓度升高；在敲除组和双敲除组中观察到相反的情况。帕他色替在异位表达CCT6A的TNBC细胞中显示出增强的抑制细胞增殖、侵袭和迁移的功效。当帕他色替和抗PD1联合治疗时，肿瘤体积和质量均明显减少，CD45+CD8+ T细胞表达增加，CD45+CD4+CTLA4+和CD45+CD4+PD1+ T细胞表达减少。本研究结果表明，TRIM21通过PI3K/AKT信号通路促进k48相关的泛素化介导的CCT6A降解，从而抑制TNBC的进展。这凸显了帕他色替和/或抗pd1作为治疗策略的潜力，特别是对于过表达CCT6A的TNBC患者。
背景信息
乳腺癌是全球常见的癌症之一，其发病率在全球范围内呈上升趋势。三阴性乳腺癌（TNBC）占乳腺癌总病例的15%-20%，与早期转移性复发和较差的患者预后有关。由于其基因组成的多样性和缺乏可识别的分子靶点，在提高TNBC个体的存活率方面只取得了轻微的进展。虽然TNBC侵袭性表型的关键分子和机制已经部分阐明，但仍需要进一步的研究来充分阐明这一复杂的过程。因此，应确定TNBC诊断和治疗的潜在靶点。
CCT6A是含伴侣蛋白TCP1 （CCT）复合物的一个组成部分。早期研究表明，近期产生的细胞质蛋白中约有5%-10%通过CCT伴侣蛋白转运，强调了其在组织细胞骨架中的关键功能。研究已经确定了CCT6A在多种肿瘤中的促肿瘤作用。研究人员发现CCT6A通过抑制SMAD2抑制转化生长因子β (TGF-β)介导的肺癌转移信号。此外，CCT6A与结直肠癌的不良预后和肿瘤转移以及免疫浸润减少有关。在乳腺癌和肝细胞癌的发展过程中，CCT6A起着至关重要的作用。然而，CCT6A在BC尤其是TNBC中的作用机制有待进一步探索。研究人员报道了CCT6A敲低抑制骨肉瘤细胞生长和AKT通路的体外激活。但相关研究相对较少，需要进一步深入研究。
TRIM21泛素化CCT6A并通过其酶活性环结构域抑制TNBC进展
为了证明CCT6A通过TRIM21介导的泛素化促进TNBC的进展，研究人员生成了过表达CCT6A的BT-549细胞，这些细胞过表达TRIM21或缺失RING结构域的TRIM21突变体（TRIM21-ΔRING）。与BT-549CCT6A细胞相比，BT-549TRIM21+CCT6A细胞的增殖、迁移和侵袭能力明显降低。与BT-549TRIM21+CCT6A细胞相比，BT-549CCT6A+TRIM21-ΔRING细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著增强。MDA-MB-231shCCT6A抑制细胞增殖、迁移和侵袭；而MDA-MB-231shCCT6A+shTRIM21部分消除了MDA-MB-231shCCT6A对细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。因此，研究人员得出结论，TRIM21通过其酶活性环结构域的E3泛素连接酶活性抑制TNBC的进展，从而促进CCT6A的体外降解。
TRIM21泛素化含有TCP1亚基6A （CCT6A）的伴侣蛋白，并通过其酶活性环结构域抑制三阴性乳腺癌（TNBC）的进展
研究人员进一步在体内验证了TRIM21介导的泛素化和CCT6A降解对TNBC的影响。将MDA-MB-231CCT6A、MDA-MB-231CCT6A、MDA-MB-231CCT6A+TRIM21或MDA-MB-231CCT6A+TRIM21-ΔRING细胞注射到裸鼠体内，与MDA-MB-231CCT6A细胞相比，MDA-MB-231CCT6A+TRIM21细胞的肿瘤重量和肿瘤体积明显减少。与MDA-MB-231CCT6A+TRIM21组相比，MDA-MB-231CCT6A+TRIM21-ΔRING组肿瘤体积和肿瘤重量显著增大。这些发现表明，TRIM21的敲低部分逆转了CCT6A敲低引起的肿瘤体积的减小。
此外，研究人员评估了TRIM21和CCT6A对肿瘤转移的影响。研究发现与4T1Cct6a+Trim21组相比，4T1Cct6a+Trim21-ΔRING组的转移部位和SUVmax值显著增加。注射4T1shTrim21细胞的小鼠比注射4T1shCct6a+shTrim21细胞或4T1shCct6a细胞的小鼠表现出更多的转移位点和更大的SUVmax，并且4T1shTrim21组部分逆转了4T1Cct6a引起的促转移作用。此外，TIME分析显示，与4t1ev指示的小鼠相比，4t1cct6a指示的小鼠肺转移组织中Treg细胞计数和FOXP3表达增加。研究人员还发现，与4T1Cct6a+Trim21-ΔRING小鼠组相比，4T1Cct6a+Trim21小鼠组的肿瘤减少。此外，与4T1EV组相比，4T1Cct6a组小鼠肺转移组织中CD8+ T/IFN-γ表达和Th1/T-bet表达降低，而4T1Cct6a+Trim21小鼠组与4T1Cct6a+Trim21-ΔRING小鼠组相比，肿瘤计数增加。另外，与4T1EV相比，注射4T1Cct6a组小鼠肺转移组织中Th2/GATA3的表达量增加，表明4T1Cct6a+Trim21小鼠组的肿瘤比4T1Cct6a+Trim21-ΔRING小鼠组的肿瘤减少。4T1shCct6a增加了CD8+T/IFN-γ和Th1/T-bet的表达量，降低了Treg/Foxp3和Th2/GATA3的表达量；然而，4T1shCct6a+shTrim21部分逆转了由4T1Cct6a细胞引起的免疫微环境的变化。这些发现表明，在体内和体外，TRIM21通过其E3泛素连接酶RING结构域介导CCT6A的降解并抑制TNBC的进展。
研究意义
本研究首次发现CCT6A被TRIM21泛素化。这一发现为靶向蛋白修饰乳腺癌治疗开辟了新的途径。研究人员还强调了CCT6A在p53调控中的新发现，为p53相关研究提供了新的视角。
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